罕见病研究无人区——中国学者在先天性巨大黑痣基础研究领域取得新进展

先天性巨大黑痣（giant congenital melanocytic nevi, GCMN）又称黑毛痣、兽皮痣，指出生即有的，累及大面积皮肤的黑痣，在新生儿中发病率约为1/20000。该病最大可累及超过80%的患儿体表面积，表面可粗糙被毛，严重影响患儿容貌，同时相关研究报道其终身恶变几率可高达5%-10%，另有约3%-12%的GCMN患者伴有中枢神经系统累及，称为神经皮肤黑变病，病变可导致患儿脑积水，癫痫发作以及神经功能损害。目前对GCMN治疗手段有限，对于较小面积的病灶，尚能手术切除，对累及全身大部面积的患者尚无相关治疗手段。在基础研究领域，受限于体内外研究模型平台的缺乏，目前对GCMN的基础研究开展极为困难。

近日国际色素细胞学会联合会会刊《色素细胞及黑色素瘤研究》(Pigment Cell & Melanoma Research, JCR Q1)发表了上海第九人民医院整复外科李青峰教授团队的最新研究成果——成功构建首株先天性巨大黑痣永生化细胞株（Establishment and characterization of an immortalized human giant congenital melanocytic nevi cell line）。据悉，以往无可长期培养的先天性巨大黑痣良性细胞模型，这极大限制了该疾病的相关基础研究，为弥补这一空白，整复外科博士后余庆雄在导师李青峰教授的指导下，从一例GCMN患者手术切除的巨痣皮肤组织中分离培养巨痣细胞，并经过SV40T转染进行永生化，建立国际上首株永生化先天性巨大黑痣细胞系GNC-9H-01，经鉴定，该细胞系能稳定传代，并伴显著色素合成。经基因测序发现，该细胞株携带杂合NRAS^Q61K基因突变。裸鼠种植实验显示该细胞系能在小鼠皮下成活形成种植瘤。目前该细胞系保藏于中国典型细胞保藏中心，并已进行了发明专利申请。

动物模型也是疾病研究中的重要工具，李青峰教授团队也致力于GCMN小鼠模型的构建。基于前期对中国GCMN患者群体的大样本量全外测序研究，余庆雄博士后发现中国患者群体中NRAS^Q61K突变基因发生率是NRAS^Q61R突变的2.3倍。因此团队选择了构建黑色素细胞选择性表达NRAS^Q61K突变基因的小鼠模型（Dpp3-Cre/NRAS^Q61K），该模型小鼠成功表现出与人先GCMN类似的表型。目前，九院整复外科是继瑞士苏黎世大学、哈佛大学麻省总院皮肤生物中心之外第三个，也是国内首个成功构建先天性巨大黑痣模型小鼠的研究中心。余庆雄博士后介绍，相对于国外的两种模型小鼠，九院自主构建的模型小鼠方法稳定可靠，背景一致性高，繁育方案简单，且更贴近中国GCMN患者突变特征。据悉，该模型小鼠已申请国家发明专利。

目前对先天性巨大黑痣的发生、恶变机制尚未完全清楚，治疗也仅停留在手术切除层面，对于累及皮肤面积过大的患者，无手术治疗的可能。九院整复外科作为全国最大的整形外科中心之一，每年接诊大量的先天性巨大黑痣患者，而临床治疗手段的进展亟需基础研究领域的突破，目前构建的GCMN体内外研究模型平台极大拓展了相关基础研究的开展。据悉，目前李青峰教授团队在已构建的GCMN体内外模型平台的基础上，联合瑞金医院国家转化医学中心（上海）药物筛选平台，积极推进GCMN靶向治疗药物筛选及验证，未来有望开发自主知识产权的GCMN靶向治疗药物，为广大的先天性巨大黑痣患者带来福音。

原始出处

Yu, Qingxiong, et al. "Establishment and characterization of an immortalized human giant congenital melanocytic nevi cell line." Pigment Cell & Melanoma Research 35.3 (2022): 356-368.