PLoS One：通过靶向DKK1的表达，miR-433-3p可促进成骨细胞的分化
2017-08-07 MedSci MedSci原创
Dickkopf-1（DKK1）是经典Wnt信号通路的一个功能强大的拮抗剂，并作为骨质疏松症的生物标志物。DKK1的表达与骨质量和成骨细胞的成熟程度密切相关。本实验采用小鼠原代骨髓细胞和成骨细胞系。使用荧光素酶报告基因检测法和免疫印迹法进行验证miR-433-3p是否可调控DKK1的翻译。使用整合mir-433-3p的慢病毒载体感染成骨细胞来源的大鼠骨髓细胞。体外评估构建的慢病毒介导的miR-43
Dickkopf-1（DKK1）是经典Wnt信号通路的一个功能强大的拮抗剂，并作为骨质疏松症的生物标志物。DKK1的表达与骨质量和成骨细胞的成熟程度密切相关。本实验采用小鼠原代骨髓细胞和成骨细胞系。使用荧光素酶报告基因检测法和免疫印迹法进行验证miR-433-3p是否可调控DKK1的翻译。
使用整合mir-433-3p的慢病毒载体感染成骨细胞来源的大鼠骨髓细胞。体外评估构建的慢病毒介导的miR-433-3p稳定表达，并检测碱性磷酸酶（ALP）活性和矿物沉积层。使用原位杂交法观察原代成骨细胞中miR-433-3p的表达。建立OVX大鼠模型来模拟绝经后骨质疏松症，发现循环mir-433-3p和miR-106b表达异常。
结果表明，miR-433-3p或可调控DKK1基因。此外，血清DKK1与循环mir-433-3p的水平显著相关（r = 0.7520，P = 0.046）。荧光素酶报告基因分析显示，miR-433-3p siRNA的荧光信号降低，表明mir-433-3p直接调控DKK1 mRNA的翻译。当miR-433-3p与 DKK1 3'UTR突变位点结合后，则不会发现荧光信号降低。
蛋白质免疫印迹结果验证了miR-433-3p抑制90%DKK1蛋白的表达。相似地，突变组未观察到蛋白表达的变化。慢病毒介导miR-433-3p的稳定表达增加了人和鼠来源的永生化细胞中ALP的活性和矿化。通过实时PCR分析及原位杂交实验发现，原代成骨细胞与永生细胞相比miR-433-3p的水平更高。
总而言之，该研究结果进一步强调在miR-433-3p在DKK1/WNT/β-catenin通路中的重要作用，通过降低DKK1的表达水平，并诱导成骨细胞分化。
原始出处：
Xiaolin Tang, Jiantao Lin, et al., MicroRNA-433-3p promotes osteoblast differentiation through targeting DKK1 expression. PLoS One. 2017; 12(6): e0179860. Published online 2017 Jun 19. doi: 10.1371/journal.pone.0179860.
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