生化异常反应曲线解析---CK溶血了

采血后，由于不当因素或采血管原因，标本发生溶血，这会对很多生化检测项目产生干扰，但是人类红细胞中几乎不含CK，为什么溶血后CK会测值偏高呢？本期推送内容，通过反应曲线和检测原理，探讨溶血对CK的影响机制。如感兴趣，关注上方“检验科”，后期会推送一系列异常反应曲线。

先看一组CK在日立008as上的反应曲线：

图1 CK 校准品反应曲线

图2 CK溶血标本反应曲线

 通过观察两组反应曲线，我们是否有以下疑问：

1.  标本+R1试剂（反应5min），如上图测光点1-19，校准品吸光度没有上升，而溶血标本明显有反应发生，这是什么原因？

2. 通过反应曲线，可以确认CK检测采用的是速率法A（不明白可以参考历史信息：反应曲线解析之速率法），加入R2试剂后，启动反应，有测光区域（27点-38点），为什么标本+R1试剂也有测光区域（12点-18点）？

为了更好的解释以上问题，我们先看下CK检测的原理（试剂说明书）

简单分析下检测原理：

第一步反应，肌磷酸和ADP为试剂成分，血清中CK催化底物，生产ATP

第二步反应，葡萄糖和HK为试剂成分，HK催化下，生产葡萄糖-6-磷酸

第三步反应，NADH+和G-6-PDH为试剂成分，G-6-PDH催化下，生产NADPH

CK活性越高，生产ATP的速度越快，进而引起后续反应，最终生产NADPH的速度越快，通过测定NADPH的生成速度，得到标本中CK的活性。

对于整个反应过程，ATP是最关键的中间成分，可以引起第二步和第三步反应，调研资料得知，标本溶血后，红细胞中的腺苷酸激酶（AK）释放到标本中，AK是使ADP和ATP之间相互转化的酶，由于试剂中含有ADP，于是额外产生了ATP，故会造成结果偏高。另外溶血后红细胞内代谢产生少量ATP也会释放到血清中，对结果造成干扰。

对于上述的2个疑问，我们做如下解释：

1.  溶血样本+R1试剂，发生干扰反应，主要是因为红细胞内含有的AK释放到血清中，进而产生ATP，引起后续反应。查看试剂主要组成成分，其中R1试剂，如果有腺苷酸激酶（AK）存在，则会引起最终反应，进而验证了推论。

2.  加入R2试剂启动反应后的反应速度包含两部分：溶血引起的干扰反应速度+血清中CK催化反应引起的反应速度，同时选择在样本+R1试剂时测光（12点-18点），最终计算时，会减去溶血引起的干扰反应速度（S+R1过程），得到正确结果。

最后说明下，如果您选择的试剂，不能排除溶血干扰（试剂厂家问题），那么溶血标本的反应曲线，有可能在标本+R1试剂反应阶段，吸光度并无上升，就不能通过两个测光区域减少干扰。

溶血对CK测定的干扰，在CK低浓度（活性）时，对结果干扰较大，高浓度影响一般较小。

以上分析，仅供参考，欢迎各位同行多提意见。