Clin Chem：简单的一步放大和标记程序对拷贝数变化进行检测

由于拷贝数变异(CNVs)的具体特征，需要特定的检测和表征方法。我们开发了一种简单的CNV检测一步扩增和标记程序(EOSAL-CNV)，这是一种基于比例扩增和标记扩增子的新方法。

我们使用加尾引物进行特异性扩增，使用一对标记探针(仅1个标记)在1个反应中对所有扩增子进行扩增和标记。将产物直接装入毛细管DNA测序仪中，对片段进行分级和定量。获得的数据可以通过Microsoft Excel电子表格或EOSAL-CNV分析软件进行分析。我们使用LDLR（低密度脂蛋白受体）基因开发了检测方案，其中包括23个具有8种不同CNV的样品。优化协议后，将其用于以下多重基因：BRCA1（与BRCA1 DNA修复相关），BRCA2（与BRCA2 DNA修复相关），CHEK2（检查点激酶2），MLH1（mutL同源物1）和MSH6（mutS同源物6 ），MSH2（mutS同源物2）加上EPCAM（上皮细胞粘附分子）和第17号染色体（尤其是TP53 [肿瘤蛋白53]基因）。此外，我们将该程序与多重连接依赖性探针扩增（MLPA）进行了比较。

研究结果显示，CNV检测的简单过程需要150分钟，其中手工操作部分少于10分钟。在分析了240多个样品后，EOSAL-CNV排除了所有对照中CNV的存在，并且在所有情况下，使用MLPA和EOSAL-CNV的结果均相同。 肿瘤样品中17p区域的分析显示荧光原位杂交与EOSAL-CNV有100％的相似性。

研究表明，EOSAL-CNV能够可靠、快速、简便地检测CNVs。它为MLPA等目标分析方法提供了一种替代方法。

原始出处：

Sebastián Blesa,María D Olivares,Easy One-Step Amplification and Labeling Procedure for Copy Number Variation Detection

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