Acta Neuropathologica：丝氨酸375位磷酸化的抗TDP-43抗体提示FTLD-TDP亚型间TDP-43聚集体的构象差异
2020-08-24 MedSci原创 MedSci原创
超磷酸化TDP-43的聚集是额颞叶退行性变（FTLD–TDP）最常见的分子形式的标志性病理特征，在绝大多数肌萎缩性侧索硬化（ALS–TDP）病例中也是如此。
由反式反应脱氧核糖核酸/核糖核酸结合蛋白Mr 43 kD (TDP-43)组成的异常神经元和胶质内含物是两种破坏性神经退行性疾病的标志性病变，这两种疾病包括原发性TDP-43蛋白病、额颞叶变性TDP-43病(FTLD-TDP)和绝大多数肌萎缩性侧索硬化(ALS-TDP)。超磷酸化TDP-43的聚集是额颞叶退行性变（FTLD-TDP）最常见的分子形式的标志性病理特征，在绝大多数肌萎缩性侧索硬化（ALS-TDP）病例中也是如此。然而，大多数特定的磷酸化位点仍有待确定，它们与FTLD-TDP和ALS-TDP的致病性、临床和病理表型多样性的相关性仍有待确定。
本文作者研制了一种针对位于低复杂度域的丝氨酸375处磷酸化的TDP-43抗体（pTDP-43S375），并用它来研究FTLD-TDP和ALS-TDP一系列病例（n=44）中是否存在S375磷酸化。免疫印迹分析显示，在所有被检查的FTLD-TDP亚型（A-C）和ALS-TDP中，S375的磷酸化是病理性TDP-43物种的一致特征，包括全长片段和C末端片段。然而，特别令人感兴趣的是，详细的免疫组化分析显示，在病理亚型中，含有pTDP-43S375抗血清的内含物的免疫反应谱有显著差异。ALS-TDP的TDP-43病理学、FTLD-TDP B型(包括C9orf72突变的病例)和FTLD-TDP C型均显示出强烈的pTDP-43S375免疫反应性，其数量和形态与以S409/410磷酸化的抗TDP-43抗体为金标准所见相似。与此形成鲜明对比的是，通过pTDP-43S375免疫组化发现，散发和遗传形式的FTLD-TDP A型（包括GRN和C9orf72突变的病例）的TDP-43病理几乎完全阴性。这些数据表明，pTDP-43S375抗血清与TDP-43聚集体具有亚型特异性、构象依赖性的结合，这与TDP-43不同结构的构象一致（即TDP-43菌株）是TDP-43蛋白病表型多样性的分子基础。
方法：利用定制的多克隆抗体交叉亲和纯化服务制备了兔抗丝氨酸375处磷酸化TDP-43的多克隆抗体。简单地说，用与人TDP-43的368-379氨基酸相对应的磷酸肽免疫家兔：ac-EPNQAFGS（p）GNNS-C-CONH2。利用修饰和未修饰肽的亲和层析纯化磷酸特异性抗体。公司通过定性间接酶联免疫吸附试验（ELISA）对交叉亲和纯化抗体的磷酸特异性进行初步验证。
总结：将S375处的TDP-43磷酸化描述为散发性和遗传性ALS-TPD和FTLD-TDP的一致特征，并证明使用这种新型抗体的标准染色方案可以区分FTLD-TDP-a型的TDP-43病理学与其他FTLD-TDP类型和ALS-TDP的病理学特征，最有可能以构象依赖的方式，与交替的TDP-43构象作为表型多样性的生化基础的概念相一致。
Neumann, M., Frick, P., Paron, F. et al. Antibody against TDP-43 phosphorylated at serine 375 suggests conformational differences of TDP-43 aggregates among FTLD–TDP subtypes. Acta Neuropathol (2020).
本网站所有内容来源注明为“梅斯医学”或“MedSci原创”的文字、图片和音视频资料，版权均属于梅斯医学所有。非经授权，任何媒体、网站或个人不得转载，授权转载时须注明来源为“梅斯医学”。其它来源的文章系转载文章，或“梅斯号”自媒体发布的文章，仅系出于传递更多信息之目的，本站仅负责审核内容合规，其内容不代表本站立场，本站不负责内容的准确性和版权。如果存在侵权、或不希望被转载的媒体或个人可与我们联系，我们将立即进行删除处理。
在此留言
#TDP-43#
44
#丝氨酸#
36
#pathologic#
27
#CTA#
28
#Pathol#
32
学习了
64
学习
98