化学发光免疫测定的影响因素分析

化学发光免疫 (chemiluminescence immunoassay,CLIA),是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。主要具有灵敏度高、特异性强、试剂稳定且有效期长、方法稳定快速、检测范围宽、操作简单、自动化程度高等优点而被临床普遍接受。本文就化学发光免疫临床操作中可能出现的影响因素做如下分析。

1 标本的影响

要注意避免出现严重溶血。血红蛋白中含有血红素基团，其有类似过氧化物的活性，因此，在以HRP为标记酶的酶促化学发光测定中，如血清标本中血红蛋白浓度较高，则其就很容易在温育过程中吸附于固相，从而使后面加入的HRP底物反应值偏高，造成假阳性。 样本的采集及血清分离中要注意尽量避免细菌污染，一则细菌的生长，其所分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白产生分解作用；二则一些细菌的内源性酶如大肠杆菌的β-半乳糖苷酶本身会对用相应酶作标记的测定方法产生非特异性干扰。新鲜标本的检测结果更能准确反映机体的真实情况，应在采血后24小时内完成检测。血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清，血液还未开始凝固时即强行离心分离血清，使血清中仍残留部分纤维蛋白原，易造成假阳性结果。如24小时内不能进行检测，需将血清分离后，妥善保存于-20℃冰箱，做好原始记录，标本管上最好标上待检者姓名、日期，反复冻融，容易造成假阳性。

2 试剂影响

化学发光免疫检测试剂厂家较多，不同厂家生产的试剂灵敏度与特异性存在一定的差别，使用质劣的试剂必然导致结果的假阳性或假阴性。因此，选择高质量的试剂是保证结果准确的关键之一。实验前，先将实验中所需的所有试剂及待测样品从冰箱中取出，待温度与室温（25℃）平衡1小时以上后使用。已开封试剂盒每次使用后需及时放回2～8℃冰箱内保存，应尽可能在开封后1个月内使用。不同批号试剂盒中组分不能混用，混用造成重复性差。

3 操作技术的影响

吸量不准确，导致测定的重复性差，直接影响检测结果，因此加样器要经常清洗，定期校准。加样过快容易造成孔间污染。应避免加错样本。加样本及试剂时，避免加在孔壁上部非包被区，造成重复性差；温浴影响 ，弱阳性样本检测不出，温育的时间或温度不够。干浴与水浴存在明显的差异，尽可能使用水浴，并要求固相板放入水中，减少受热不均，贴密封膜，防止污物浸入；振荡影响，室温振荡，实验室室温应控制在25℃（实验室应加装空调机以确保室内温度在不同季节保持相对稳定），实验室应相对固定振荡器的振荡频率；洗板的影响，配制洗板液的蒸馏水要合格，量筒要干净，否则造成假阴性，洗板不干净，仪器针孔堵塞，容易造成假阳性：发光值的影响，洗板后，将等量的发光液A、B液混匀后，每孔加混合后的发光液，避免漏加。发光液变质容易造成假阴性。准确发光反映时间，发光反应时间太短，造成结果假阴性。

综上所述，对临床化学发光免疫分析操作中出现的假阳性或假阴性结果，要从多方面进行分析，并采取相应措施排除干扰作用，从而为临床提供正确可靠的检测结果。