自噬与鼻咽癌细胞放射敏感性的关系及其机制的实验研究

沉默自噬相关基因ATG5对鼻咽癌CNE-1及CNE-2细胞放射敏感性的影响

【目的】

通过慢病毒介导的RNA干扰技术沉默自噬相关基因ATG5(autophagy-relatedgene5，ATG5)，并观察ATG5沉默对鼻咽癌CNE-1及 CNE-2细胞受到电离辐射后增殖能力凋亡情况及DNA双链断裂情况的影响，以探讨自噬对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响。

【方法】

使用经慢病毒包装的自噬相关基因ATG5siRNA表达载体转染鼻咽癌
CNE-1及CNE-2细胞，用Real-timePCR及Western-blot实验验证干扰效果。并用CCK-8实验检测细胞增殖能力、流式细胞术检测细胞凋亡、Western blot检测各组细胞中DNA双链断裂的标志物磷酸化组蛋白(r-histone family2Avariant，Y-H2AX)的水平，进而初步验证自噬相关基因ATG5沉默对鼻咽癌CNE细胞放射敏感性的影响。

【结果】

Real-timePCR和Western-Blot实验结果显示，与阴性对照 SCR-shRNA(scrambledhairpinSCR))组及未转染的Control组相比ATG5沉默组无论是在mRNA水平(P001)还是在蛋白水平，ATG5的表达水平均显著降低。CCK-8实验结果显示，与SCR-shRNA组及Control组相比，ATG5沉默组的CNE细胞存活率均明显降低(P005)流式细胞仪检测结果显示，经射线照射后ATG5沉默组的细胞调亡率明显高于Control组及SCR-shRNA组(P005)。Westernblot检测结果显示，经电离辐射后，各组的Y-H2AX蛋白表达水平均出现升高，且ATG5沉默组的Y-H2AX蛋白水平明显高于Control组及SCR-shRNA组。

【结论】

慢病毒介导的RNA干扰可有效抑制自噬相关基因ATG5的表达，抑制自噬可以增强鼻咽癌CNE细胞的放射敏感性。