CTI：生长激素释放激素拮抗剂MIA602在结节病样肉芽肿中的活性及其作用机制

目的：生长激素释放激素(GHRH)是垂体分泌生长激素(GH)的有力刺激因子。虽然生长激素释放激素对免疫细胞的生长是必不可少的，但其拮抗剂在肉芽肿性疾病中的调节作用尚不清楚。

方法：在此，我们报道了GHRH受体(R)在人结节病肉芽肿组织中的表达，并用ELISA、免疫组化、RNA序列分析和流式细胞术等不同方法证实了GHRH拮抗剂MIA602在两种体外人肉芽肿模型和一种活体肉芽肿模型中的抗炎作用。

结果：在体外肉芽肿模型中，MIA602可降低IL-2、IL-2R、IL-7、IL-12、IL-17A和TNF-α水平。此外，我们发现MIA602的抗炎作用似乎是通过减少肉芽肿组织中CD45+CD68+细胞和上调巨噬细胞中PD1的表达来实现的。线粒体凋亡相关蛋白表达分析显示，MIA602可上调肉芽肿中caspase-3、bcl-xl/BAK二聚体和mcl-1/Bak二聚体的表达。这些结果表明MIA602可能不会诱导细胞凋亡。

图1 肺组织病理学检查。标本来自三个受试者的淋巴结组织，(A)患者1；(B)患者2；和(C)患者4，确诊为结节病后再次切除。5µm切片进行GHRH-R染色。箭头显示肉芽肿。组织中的棕色表明GHRH-R的表达。

图2 ELISA检测结果为玻璃结节病样肉芽肿。肉芽肿是用确诊为结节病的受试者的PBMC发展而来的。四个不同的组进行了研究：对照组，结节病患者的PBMC(未用微粒治疗)；用微粒治疗的PBMC；MIA602，用MIA602治疗；用甲基强的松龙治疗。显示的数据是MAB微粒治疗后48h的平均细胞因子浓度±SEM。

图3 通过ELISA测量体外肉芽肿模型中促凋亡（活性胱天蛋白酶-3）和抗凋亡（存活蛋白，Bcl-xL/Bak二聚体和Mcl-1/Bak二聚体）因子的蛋白质水平。

图4 小鼠肺(右下叶)GHRH-R的典型图像免疫荧光显微镜检测。所有代表性图像(A)放大倍数分别为109和209。(B)P值表示被攻击的小鼠与对照组(N=3只对照组、4只被挑战的小鼠和3只MIA602小鼠)之间肺染色细胞的百分比差异。对照组不治疗，肉芽肿组和MIA602组用MAB微粒治疗。肉芽肿组给予生理盐水治疗，MIA602组给予5LG MIA602每日注射。对照组也注射生理盐水。免疫组织化学染色强度和面积百分比由两位肺病理学家盲法评价。数据来自代表三个独立实验的一个实验。

图5 肺H&E的代表性图像显示为对照组、肉芽肿、用MIA602治疗的肉芽肿和用甲基强的松龙(A)治疗的肉芽肿。不同标志物(CD30、CD68、PD-1和PD-L1)的肺染色细胞在攻击小鼠和对照组之间的百分比差异(B)。对照组(3只)不攻击，肉芽肿组(4只)和MIA602组(3只)用单抗微球攻击。MIA602组小鼠每天皮下注射5LG MIA602，而肉芽肿组和对照组只注射生理盐水。免疫组织化学检测受累面积百分比。

图6 小鼠肺单个细胞的流式细胞术分析。活白细胞定义为CD45+，CD45+CD68+定义为巨噬细胞。我们使用了四组不同的小鼠：对照组(3只小鼠)；肉芽肿(4只小鼠)，用MAB微粒攻击；MIA602(3只小鼠)，用MAB微粒攻击并用MIA602治疗；以及甲基强的松龙(3只小鼠)，用MAB微粒攻击并用甲基强的松龙治疗。每一块地都有显著的变异(P值)。

结论：我们的研究结果进一步表明GHRH-R可能是治疗肉芽肿性疾病的潜在临床靶点，MIA602可能被用作结节病的一种新的治疗药物。

原文出处：

Zhang C,  Tian R,  Dreifus EM,et al,Activity of the growth hormone-releasing hormone antagonist MIA602 and its underlying mechanisms of action in sarcoidosis-like granuloma.Clin Transl Immunology 2021;10(7)