Nature、Cell：高效基因剪刀CRISPR，哪里不服剪哪里！
2016-12-13 佚名 默克生命科学微信号
CRISPR，作为生物学的新宠，与ZFN、TALEN并称为三大基因编辑工具。今天就简要嘚吧一下它的厉害。CRISPR来源于细菌获得性免疫系统。2013年，劳伦斯伯克利国家实验室（Berkeley Lab）的科学家发现了CRISPR这种有效的基因组编辑新方法（Science）。注：图片摘自网络 基因编辑工具需要两个关键元素，一个识别序列，一个剪切酶。CRISPR成簇的规律间隔的短回文重复序
CRISPR，作为生物学的新宠，与ZFN、TALEN并称为三大基因编辑工具。今天就简要嘚吧一下它的厉害。CRISPR来源于细菌获得性免疫系统。2013年，劳伦斯伯克利国家实验室（Berkeley Lab）的科学家发现了CRISPR这种有效的基因组编辑新方法（Science）。
注：图片摘自网络
基因编辑工具需要两个关键元素，一个识别序列，一个剪切酶。CRISPR成簇的规律间隔的短回文重复序列gRNA用于识别靶标序列，Cas9（CRISPR-associated 9）核酸酶用于剪切。
CRISRP的名字非常厉害：
Clustered 成簇的
Regulatory 规律
Interspaced间隔的
Short 短
Palindromic 回文
Repeat重复序列
CRISPR的gRNA合成非常简单，于是被迅速广泛应用：一是建立突变体，另一个是进行大规模筛选。今天给大家举个栗子，如何运用CRISPR进行大规模突变体库的建立与靶标基因的筛选！ 这篇文章发表于2015年3月的Cell杂志上，其作者之一张锋是CRISPR技术先锋开拓者，也是CRISPR专利的持有人，尽管专利备受争议。
☆研究流程：
1 建立实验模型:在非转移性的细胞系中过表达Cas9-EGFP
2 利用慢病毒感染上述细胞系，转染sgRNA文库入细胞
3 sgRNA转染导致细胞突变，构建突变体细胞库
4 将混合的突变体细胞移植至免疫投降小鼠中，有的细胞会发生转移，这说明这个细胞中的突变导致其具备了转移的特性。
5 通过检测该细胞中富集的sgRNA可以预测导致表型的基因。
研究重要意义：
CRISPR由于只需合成sgRNA，操作简单，因为使其在大规模突变体筛选上的应用成为可能，而同类的基因编辑工具ZFN与TALEN所需要的序列合成非常繁琐并且效率不高。
CRISPR技术应用发展迅速，日前，华西医院卢铀教授率先申请在人体上开展经CRISPR改造过的T细胞治疗实验，世界领先！几乎是同期，Salk研究所首次报道了应用CRISPR对非分裂细胞的基因编辑，为非分裂细胞的遗传性疾病的患者带来了曙光。
原始出处：
Suzuki K1, Tsunekawa Y2, Hernandez-Benitez R1,3, Wu J1,4, Zhu J5,6, Kim EJ7, Hatanaka F1, Yamamoto M1, Araoka T1,4, Li Z8, Kurita M1, Hishida T1, Li M1, Aizawa E1, Guo S8, Chen S8, Goebl A1, Soligalla RD1, Qu J9,10, Jiang T6,11, Fu X5,6, Jafari M6, Esteban CR1, Berggren WT12, Lajara J4, Nuñez-Delicado E4, Guillen P4,13, Campistol JM14, Matsuzaki F2, Liu GH10,15,16,17, Magistretti P3, Zhang K8, Callaway EM7, Zhang K5,6,18,19, Belmonte JC1.In vivo genome editing via CRISPR/Cas9 mediated homology-independent targeted integration.Nature. 2016 Dec 1
Chen S1, Sanjana NE2, Zheng K3, Shalem O3, Lee K4, Shi X3, Scott DA3, Song J4, Pan JQ3, Weissleder R5, Lee H4, Zhang F6, Sharp PA7.Genome-wide CRISPR screen in a mouse model of tumor growth and metastasis.Cell. 2015 Mar 12
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#Cell#
39
#基因剪刀#
34
#Nat#
29
#CRISPR#
34
基因刀 是一个好想法
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棒棒哒??
0
CRISPR由于只需合成sgRNA，操作简单，因为使其在大规模突变体筛选上的应用成为可能，而同类的基因编辑工具ZFN与TALEN所需要的序列合成非常繁琐并且效率不高。
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