Gut：早发型克罗恩病相关新突变位点被发现

IBD是一组由免疫介导的疾病，其主要特征是慢性复发的肠道炎症和各种各样的肠外表现。IBD肠内外的炎症可能和遗传与环境因素相关，但未能完全解释清楚。随着新一代测序工具的发展，遗传因素的研究成为热点。

来自德国石勒苏益格-荷尔斯泰因州大学医疗中心的Sebastian等进行了一项研究，结果表明CTLA4的变异可能是早发型克罗恩病伴严重自身免疫疾病的孟德尔遗传型的基础，文章发表在2014年11月的Gut杂志上。

作者选取两例患早发克罗恩病伴严重自身免疫疾病的患者(他们是同母异父的兄妹)及其家人进行了外显子测序，免疫细胞的表型和功能进行分析，以及在计算机上模拟并在体外对细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)的结构和功能进行了分析。

图一：家族谱系和临床表现

结果显示，CTLA-4 Y60C是编码CTLA-4蛋白(在T细胞上表达的共抑制蛋白;对调节T细胞的激活是必要的)的CTLA4基因上一个新的错义突变。CTLA-4 Y60C突变影响了进化高度保守的残基(CTLA-4 Tyr60)，该变异可能影响蛋白质的折叠及结构的稳定性，并可能使得CTLA-4蛋白的二聚作用及与CD80结合作用受损。

图二：CTLA4 Tyr60是一个进化保守的残基，它对于CTLA-4的结构稳定和二聚作用起重要作用。A.人类CTLA-4和CD28与其他哺乳动物的同源基因的多重序列对比，提示Tyr60在脊椎动物的同源基因中保守。B.和CD80结合的CTLA-4蛋白质结构，显示Tyr60位于CTLA-4的核心且接近与CD80结合位点。C.在转染了WT(Tyr60)和突变(Cys60)及空白质粒对照的HEK293细胞中，CTLA-4和β肌动蛋白在还原和非还原条件下的蛋白质印记分析。

图三：CTLA-4 Y60C突变和结合CD80能力受损相关。

研究同时发现CTLA-4 Y60C携带者的肠道炎症和自身免疫显示出不完全外显率，即携带者的临床表现的范围可以从无症状携带者状态延伸到致命的自身免疫和肠道炎症状态。

在有临床症状的CTLA-4 Y60C携带者中，体外研究显示T细胞增殖增加，在体研究显示记忆T细胞和自然T细胞的比值增加，该发现与T细胞激活调控受损相一致。

图四：CTLA-4野生型和Y60C携带者的T细胞表型和功能。A和B：CD45RO+(A)细胞和CD62L+(B)细胞在CD4+T细胞(上行)和CD8+T细胞(下行)的比例。C：流式细胞显示Treg细胞在CD3+CD4+T细胞的比例。D：3-胸腺嘧啶核苷掺入实验显示的T细胞增殖情况。

该研究提示CTLA4的变异可能是早发型克罗恩病伴严重自身免疫疾病的孟德尔遗传型的基础，但自身免疫疾病的不完全外显性进一步提示可能还存在其他遗传因素以及环境因素作用。