《新英格兰杂志》：使用CD34+造血细胞的慢病毒基因疗法治疗A型血友病

严重的A型血友病是一种X连锁疾病，特征为血液中可测量的凝血因子VIII活性低于1%，伴随有关节和肌肉自发性出血以及偶尔危及生命的出血。当前，A型血友病主要通过定期补充凝血因子VIII或使用其他止血药物来预防出血。然而，这种管理方式存在诸多挑战，包括频繁注射、高昂费用以及可能出现的免疫反应。

国外研究团队进行了一项单中心临床试验，涉及5名22至41岁的严重A型血友病患者（无因子VIII抑制剂）。自体造血干细胞(HSC)在体外被CD68-LV-ET3慢病毒载体转导，该载体包含一个新的F8转基因(ET3)，由髓系导向的CD68启动子驱动。

参与者分为两组：一组未使用转导增强剂（Group 1），另一组使用了转导增强剂（Group 2）。所有参与者在接受移植前均接受了骨髓消融预处理。研究评估了治疗的安全性（植入情况和方案相关毒性）及有效性（因子VIII活性和年化出血率）。

参与者接受的CD68-ET3-LV转导自体CD34+ HSC剂量为每公斤体重5.0×10^⁶至6.1×10^⁶个细胞。载体拷贝数分别为：Group 1两名参与者分别为1.0和0.6个拷贝/细胞；Group 2三名参与者分别为1.5、0.6和2.2个拷贝/细胞。在移植后第28天至最后一次随访期间，使用一阶段测定法测得的因子VIII活性水平分别为：

Group 1：中位数为5.2 IU/dL（范围3.0至8.7）和1.7 IU/dL（范围1.0至4.0）

Group 2：中位数为37.1 IU/dL（范围18.3至73.6）、19.3 IU/dL（范围6.6至34.5）和39.9 IU/dL（范围20.6至55.1）

所有参与者的年化出血率为零，累计随访时间为81个月（中位随访时间14个月，范围9至27个月）。

使用慢病毒载体转导自体HSC进行基因治疗A型血友病的结果显示，因子VIII表达稳定，其活性与外周血中的载体拷贝数呈正相关。此外，该治疗方法克服了腺相关病毒(AAV)基因治疗的一些局限性，如初始表达不稳定、逐渐下降、年龄限制以及预先存在的抗AAV抗体等。

此项临床研究表明，通过移植经过慢病毒载体转导的自体HSC来治疗A型血友病是一种可行的新方法。该方法具有以下特点：

1.长期稳定性：与AAV载体相比，慢病毒载体整合到宿主基因组中，理论上可以提供终身表达。

2.安全性：没有观察到意外的安全问题，所有参与者均达到了临床显著的循环因子VIII活性水平，足以完全阻止自发性出血，并保持稳定。

3.独特设计元素：使用CD68启动子将基因表达从HSC转向单核细胞，以避免因子VIII相关的细胞毒性。ET3转基因使得分泌效率比B域缺失的人类因子VIII高10至100倍。加入转导增强剂显著提高了因子VIII活性，同时增加了整合位点数量而不影响短期安全性。

尽管这种方法也存在一些局限性，如收集和处理HSC的过程复杂，但初步结果令人鼓舞，特别是在减少急性粘膜炎和可能的不育方面。此外，使用Treosulfan代替Busulfan作为骨髓消融药物，减少了毒副作用，四名参与者的精子计数正常。

研究早期结果揭示了一种新的基因治疗机会，适用于所有A型血友病患者，尤其是可以在早期诊断后尽早提供治疗，需要更长时间的随访和更多的临床试验将进一步验证这些预期。

参考文献：

Alok, Srivastava,Aby, Abraham,Fouzia, Aboobacker et al. Lentiviral Gene Therapy with CD34+ Hematopoietic Cells for Hemophilia A.[J] .N Engl J Med, 2024, 0: 0.