CLIN CHEM：熔解率对小扩增微流体基因分型的影响

小扩增子的高分辨率DNA融合分析是一种简单而廉价的基因分型技术。微流体可以精确而快速地控制熔化过程中的温度。近日，国际杂志 《CLIN CHEM》在线发表一项关于高速熔解分析的研究，探讨熔解率对小扩增微流体基因分型的影响。

研究人员使用微流体平台进行串联PCR和融合分析，对含有单核苷酸变体的4个靶片段扩增，然后以0.13至32℃/ s的250倍范围内的不同速率溶解。在去除背景影响，并归一化和转化为阴性导数图之后，通过目测确定基因型（n = 1728）。基因型之间的差异根据种间和种内差异通过种间区分比进行量化。而种间和种内差异以最大垂直差的绝对值作为度量。通过溶解温度对不同的纯合曲线进行了基因分型，并通过形状鉴定了杂合曲线。技术工件防止分析（0.3％），不正确性（0.06％）和不确定性（0.4％）均很小，主要发生在缓慢溶解率（0.13-0.5℃/ s）。基因型分型在8℃/ s（纯合子为2-8℃/分钟，杂合子为8-16℃/ s）时为最高，在> 0.5℃/ s的速率下无基因分型错误。PCR在10-12.2分钟内完成，在随后4分钟内采集熔解曲线至<1秒。

研究表明，微流体可以通过以高达32℃/ s的速率进行熔解分析来进行基因分型，需要<1秒获得整个熔解曲线。高速融合可以减少融合分析的时间，降低误差，改善小扩增子的基因型鉴别。结合极端PCR，高速融合可以在<1分钟内进行核酸扩增和基因分型。

原始出处：

Robert J. Pryor, Joseph T. Myrick, Robert A, et al.High-Speed Melting Analysis: The Effect of Melting Rate on Small Amplicon Microfluidic Genotyping. 2017, 63 (10)

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