惊艳！乌梅丸调控RAGE信号：江苏研究解锁抗炎肠病新机制！

溃疡性结肠炎（UC）是一种具有慢性复发特性的自身免疫性疾病，其显著特征在于黏膜炎症始于直肠，并可能逐步蔓延至结肠近端区域。尽管对于UC的确切发病机制目前尚未形成共识，但已有研究指出，免疫反应失调、肠道菌群结构的改变、遗传易感性以及环境因素的共同作用，可能共同促进了UC的发病过程。

在UC的治疗领域，美沙拉胺、硫唑嘌呤、糖皮质类固醇等，是目前临床上广泛采用的治疗手段。然而，尽管治疗方法不断推陈出新，UC的管理仍然面临巨大的临床挑战。现有治疗手段的疗效有限，且患者往往面临多种严重的副作用和治疗耐药性的问题，这使得UC的治疗成为医学界亟待解决的重要课题。

乌梅丸（WMW）作为经典的中草药配方，被广泛推荐用于治疗UC中的冷热综合征。据一项研究结果显示，WMW能够有效增加外周血调节性T细胞的数量，并促进白细胞介素-10（IL-10）的分泌，从而有效缓解由2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）诱导的大鼠结肠炎。尽管WMW在治疗炎症性肠病（IBD）方面展现出了积极的效果，然而，关于WMW治疗UC的具体作用机制，目前尚待进一步深入研究。

日前，一篇名为“Wumei Wan attenuates angiogenesis and inflammation by modulating RAGE signaling pathway in IBD: Network pharmacology analysis and experimental evidence”的论文探究了WMW对慢性结肠疾病的相关作用。

图1 论文首页

WMW保护小鼠免受DSS诱导的慢性结肠炎

研究采用2%DSS构建慢性结肠炎模型（图2A）。并将小鼠分为6组，每组6只：对照组（对照组）、模型组（DSS）、WMW低剂量组（WMW-L）、WMW中剂量组（WMW-M）、WMW高剂量组（WMW-H）、5-氨基水杨酸组（5-ASA）。在后续的实验中，WMW（3、6、12 g/kg）及5-ASA治疗均表现出显著效果，降低了DAI评分（图2B），有效缓解了DSS诱导的结肠缩短现象（图2D），并显著降低了组织学评分（图2F）。此外，5-ASA组小鼠的体重逐渐恢复至正常水平，而WMW（3、6、12 g/kg）组小鼠在经过DSS处理后，体重并未出现显著增长（图2E）。结果表明，WMW和5-ASA在治疗慢性结肠炎方面均展现出良好的疗效。

图2 WMW减轻了DSS诱导的小鼠慢性结肠炎

WMW降低了DSS刺激后结肠细胞因子的表达

研究显示，rage-配体相互作用可促使细胞因子、趋化因子以及粘附分子的表达水平上升。为验证这一点，研究者采用q-PCR技术对结肠组织中的促炎细胞因子Tnfa、Il6、Il1b和Ifnr的mRNA表达水平进行了检测。结果显示，WMW（3、6、12 g/kg）以及5-ASA均能有效抑制Tnfa、Ifnr、Il1a和Il1b的表达，然而，它们对Il6的表达并未产生统计学上的显著影响（图3A-E）。同时，ELISA的检测结果也呈现出相似的总体趋势。具体来说，WMW显著降低了结肠组织中TNF-α、IL-6、IL-1α、IL-1β和CXCL-1蛋白的表达水平（图3H-L）。

研究者通过对趋化因子的检测，验证了WMW在抗结肠炎方面的作用。发现DSS刺激可显著增强Cxcl1和Mcp1的表达。然而，当给予WMW（3、6、12 g/kg）或5-ASA处理后，Cxcl1和Mcp1的mRNA表达水平得到了显著的抑制（图3F-G）。这一发现进一步支持了WMW在抗结肠炎方面的积极作用。

图3 在DSS诱导的慢性结肠炎期间，WMW降低了炎性细胞因子和趋化因子的产生

WMW降低了DSS刺激后结肠中血管生成介质的表达

为探究WMW是否通过调控血管生成介质的基因表达来治疗结肠炎，研究采用了q-PCR技术对相关基因的表达进行了检测。如图（图4A-K）所示，在DSS给药后，Serpine1,、Spp1、Icam1、Kdr、Mmp2、Mmp9、Mmp1、iNos2、Ptgs2以及Pparg的结肠mRNA表达均呈现出显著上升的趋势。然而，当给予WMW（剂量分别为3、6g/kg、12g/kg）和5-ASA治疗后，Serpine1、Icam1、Ptgs2以及iNos2的mRNA表达均得到显著降低。此外，高剂量的WMW和5-ASA同样能够有效降低Mmp2和Mmp1mRNA的表达水平。然而，与DSS组相比，WMW组在Mmp9、Kdr以及Pparg的表达上并未展现出显著差异。

图4 WMW对枢纽目标的影响

WMW抑制RAGE表达，减少DSS诱发的上皮屏障改变

经过免疫组化和免疫印迹检测，结果显示在模型组中，RAGE蛋白水平显著升高。然而，WMW和5-ASA均能有效逆转这种升高的趋势（图5A-D）。众所周知，RAGE与多种配体，包括AGEs、淀粉样蛋白（Aβ）、S100/钙颗粒蛋白以及高迁移率组盒1蛋白（HMGB-1）的结合，能够增强RAGE的激活作用，进而激活转录因子NF-κB。此外，RAGE还参与调节屏障完整性的过程。众多研究已证实，RAGE与配体的结合可能导致屏障完整性的破坏和ZO-1表达的下降。因此，研究采用免疫荧光法，对结肠组织中ZO-1和磷酸化-p65的蛋白表达进行了检测。结果表明，WMW和5-ASA通过增强结肠ZO-1的表达，有效抑制结肠组织中NF-κB的激活，从而增强肠道屏障功能（图5E-F）。

图5 WMW降低RAGE和NF-κB活化的蛋白表达，同时增强粘膜屏障蛋白ZO-1的表达

WMW在治疗结肠炎中没有明显的副作用

研究通过测定小鼠血清生化指标来评价WMW的毒副作用。结果显示，各实验组在丙氨酸转氨酶（ALT）（图6A）、天冬氨酸转氨酶（AST）（图6B）、肌酐（CRE）（图6C）、乳酸脱氢酶（LDH）（图6D）、血尿素氮（BUN）（图6E）、肌酸激酶（CK）（图6F）以及神经丝轻链（NEFL）浓度（图6G）等方面，均未发现显著变化。此外，对各组患者心脏的组织病理学观察亦未发现明显异常（图6H）。

图6 WMW治疗结肠炎无明显副作用

结论

综上所述，通过网络药理学研究和动物实验，研究首次获取了WMW在有效阻断结肠炎血管生成、降低临床严重程度及改善组织学炎症方面的确凿证据。

参考文献：

Duan ZL, Wang YJ, Lu ZH, Tian L, Xia ZQ, Wang KL, Chen T, Wang R, Feng ZY, Shi GP, Xu XT, Bu F, Ding Y, Jiang F, Zhou JY, Wang Q, Chen YG. Wumei Wan attenuates angiogenesis and inflammation by modulating RAGE signaling pathway in IBD: Network pharmacology analysis and experimental evidence. Phytomedicine. 2023 Mar;111:154658