CLIN CHEM：并行多通道分子检测的两步等温酶扩增方法

大量导致感染性疾病的病原体使得我们很难通过单重试验鉴定致病病原体。虽然多重PCR能检测到多个靶点，但它仅限于在综合实验室，因为测试结果延迟或并不能进行多通道检测，从而导致医护人员不能获取关键的实时信息。近日，临床化学杂志（Clinical Chemistry）在线发表了一项来自宾夕法尼亚大学研究团队的研究成果。

为了满足床旁检测（POC）多重测试的需要，研究人员提出了2段、嵌套式快速（<40分钟）等温扩增测定法，称为快速扩增（RAMP）。 RAMP的第一阶段使用外环介导的等温扩增（LAMP）引物，用重组酶聚合酶放大（RPA）并扩增所有靶区。将第一级扩增产物等分到第二级反应器中，每个反应器针对特定的目标进行LAMP。该测定在微流体芯片中实施。使用比色染料或荧光染料和智能手机对LAMP扩增产物进行原位检测。

在台式和微流控格式的实验中，RAMP表现出高水平的多通道性能（≥16）及高敏感性（即1个寨卡病毒斑形成单位）和特异性（无假阳性或阴性），并且速度快（<40分钟），使用方便，并有最低限度处理样品的能力。

研究结果表明RAMP是一种混合的，2段，快速，高度灵敏和特异性测定方法，它具有广泛的多通道能力，在结合RPA和LAMP的优点的同时规避其各自的缺点。 RAMP可以在实验室中使用，但其一个明显的优势是可以简单实施在微流控格式用于POC，为医护人员提供廉价，高灵敏度的实地检测工具，以检测单个样品中的多种病原体。

原始出处：

S Jinzhao Song, Changchun Liu, Haim H. Bau, et al. Two-Stage Isothermal Enzymatic Amplification for Concurrent Multiplex Molecular Detection. CLIN CHEM. Vol. 63, Issue 3.

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