近90位专家呼吁：统一精液检查标准！

不孕不育已逐渐成为一个全球性的重大卫生难题，影响着数以千万计的育龄人口。不同于对女性不孕症的排查涉及排卵、子宫、盆腔等多种方面，对男性生育能力的评估则通常仅围绕精液质量展开。人类辅助生殖技术的出现一定程度上帮助了不孕不服夫妇摆脱困境，但其施行成功率的保证同样有赖于对精液质量的分析。甚至还有一些研究表明，男性不育症与死亡率之间存在关联，暗示精液质量还可用于识别不育症以外的男性一般健康问题。

虽然世卫组织（WHO）和国际标准化组织（ISO）对精液检查早有建议，但在世界范围内，各中心在实践过程中却缺乏真正的标准，这对确定许多研究的科学准确性乃至临床价值也产生了不利影响。比如Campbell等人在2021年发布的研究“Distribution of semen examination results 2020—a follow up of data collated for the WHO semen analysis manual 2010”中就指出，在确保不同研究的精液检查方法没有质量问题上存在诸多挑战。使用那些高度不确定性的方法，产生的随机结果则极有可能掩盖健康情形和病理性情形之间的差异。为此，基于第6版《世界卫生组织人类精液检查和处理实验室手册》和国际标准ISO23162:2021，近90位专家呼吁：应在精液检查中采用高质量的方法去产出可复现且可靠的数据。该呼吁以“Standards in semen examination: publishing reproducible and reliable data based on high-quality methodology”为题，于2022年9月16日发表于Human Reproduction（图1）[1]。

图1 研究报道（图源：[1]） 

透明度、开放性和可重复性在任何科学领域都是一个老生常谈的话题，已有大量建议、框架、指南明确地给出了提高研究可靠性的办法。在男科领域，从1980年到2010年共出版了五版关于人类精液的WHO手册。相比于前五版手册，2021年7月发布的第六版手册提供了标准高效的精液处理方案框架，对各种精子参数进行了相应的修订，强调了遗传评价的重要性，添加了来自更广泛国家地区的精液数据，删去了人类宫颈粘液这部分过时的内容。同时发布的国际标准“ISO23162:2021 Basic semen examination—Specification and test methods”作为正式标准的补充。

在呼吁专家最关心的精液检查方法方面，第六版手册给出了每一步程序必须遵守的实验室原则，以减少测量的不准确性和不精确性，从而保证不同技术人员之间、全球不同实验室之间的精液参数结果具有可比性，也使得其研究更易于在同行评审的期刊上发表。当不能遵循手册中的方法时，专家建议，应在材料和方法的部分单独说明不同之处和原因，并进一步阐明这些变化会对结果的准确性产生什么样的影响。手册还强调，人员培训、内部质量质控（internal quality control，IQC）和外部质量评估（external quality assessment，EQA）对于保证精液检查具备可靠性、一致性和可比较性不可或缺。

以下介绍手册中涉及实验室原则的部分重要环节：

1 精液样品制作

手册强调了样本采集前射精频率的重要性，并建议在样本采集前的2-7天禁欲，以减少个人生活和习惯对样本的干扰。禁欲时间的延长将可能导致精子数量增加，而活动精子比例下降。

2 预处理和预评估

精液的不同部分常常纠缠于凝胶状物质中，且天生具有异质性。射精之后的5-30分钟内精液将液化变为不太粘稠的液体状，然而这种长时间的混合并不太可能发生于体内环境。此外精液中的精子活力会随着时间推移而降低，因此当正常液化完成时，必须在射精30分钟内开始检查。

移液器或量筒会导致提及损失，因此对射精量的评估建议通过确定空容器重量和有样本容器重量来获得。对于精液样本的宏观（肉眼）检查同样是分析的重要步骤，比如可以提供样本是否为完成精液样本、是否包含血液或尿液等关键信息。

3 精子计数（二次采样） 

液化后的精液通常存在精子数量的空间不均一性，而在液化不均匀的样本中这种情况尤甚，样本量不足将增加很多替代方案的错误风险。手册建议使用正排量移液器抽取足够体积（50μl）的子样本，并进行稀释等分。血细胞计数器建议使用100微米深度带有改进Neubauer规则的。 

4 精子活力评估

手册重新引入了快行精子和慢行精子的区别。在采用非计算机辅助精子分析（computer-assisted sperm analysis，CASA）手段区分快行精子和慢性精子的情形下，节拍器打拍和目镜刻度将有助于数据结果实现可复制性。由于精子速度高度依赖于环境温度，应注意在标准化的温度（37°C）下对精子活力进行评估。

5 精子形态评估

报告中不应只有“正常”精子的比例，而忽略缺陷精子的分布。不同的染色剂会增强精子形态的不同部分，因此对于精子染色剂的选择，也应遵循手册的推荐。

手册建议采用Rothmann等人提出的结构化的方法对精子形态进行评估。精子所有部分（头部/中段/尾部）的缺陷统计均应充分考虑，避免精子头部之外其他部位异常情况的报告不足。

参考资料：

[1]Lars Björndahl, Christopher L R Barratt, David Mortimer, et al. Standards in semen examination: publishing reproducible and reliable data based on high-quality methodology, Human Reproduction, 2022;, deac189, https://doi.org/10.1093/humrep/deac189

[2]Campbell, M.J., Lotti, F., Baldi, E., et al. Distribution of semen examination results 2020 – A follow up of data collated for the WHO semen analysis manual 2010. Andrology, 9: 817-822. https://doi.org/10.1111/andr.12983

[3]Lars Björndahl, Jackson Kirkman Brown, The sixth edition of the WHO Laboratory Manual for the Examination and Processing of Human Semen: ensuring quality and standardization in basic examination of human ejaculates, Fertility and Sterility, Volume 117, Issue 2,2022, Pages 246-251, ISSN 0015-0282, https://doi.org/10.1016/j.fertnstert.2021.12.012.