J Ethnopharmacol：四逆散通过调节胆固醇代谢减轻溃疡性结肠炎小鼠肠道和肝脏损伤

背景：四逆散（SNS）是一种源自《伤寒论》的传统中药方剂，经过数千年的临床实践，被认为是治疗炎症性肠病的有效方药。然而，其生物活性成分和作用机制尚不清楚，需要进一步研究。

研究目的：评价SNS改善右旋糖酐硫酸钠(DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎(UC)及相关肝损伤的作用，探讨其生物活性成分及其机制。

方法：通过疾病活动性指数(DAI)、结肠长度、炎症因子、苏木精-伊红(H&E)染色、紧密连接蛋白表达、ALT、AST、氧化应激指标评价SNS(1.5、3、6 g/kg)对3% DSS诱导的急性小鼠结肠炎的影响。采用高效液相色谱-ESI-IT/TOF质谱法分析口服SNS后UC小鼠结肠内的化学成分及主要外源药物。然后根据主要的外源药物进行网络药理研究。

利用流式细胞术和免疫组织化学技术证实了SNS对Th17细胞分化的抑制作用以及对Th17/Treg细胞失衡的改善作用。采用LC-MS/MS、Real-time定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和western blotting技术检测结肠中氧甾醇-肝X受体(LXRs)信号转导活性。开展靶向胆汁酸代谢组学研究，揭示肝脏中胆汁酸合成的两条主要途径的变化，采用RT-qPCR和western blotting技术对胆汁酸合成关键代谢酶的表达进行表征。

结果：SNS(1.5、3、6 g/kg)降低DAI评分，保护肠黏膜屏障，抑制促炎细胞因子的产生，改善肝脏和脾脏肿大，减轻肝损伤，且呈剂量依赖性。在SNS (6 g/kg)处理的结肠炎小鼠结肠中共鉴定出22种成分，将相对含量排名前10位的成分作为SNS潜在有效化学成分，用于网络药理学研究。SNS的作用机制是通过抑制Th17细胞的分化，恢复结肠和脾脏中Th17/Treg细胞的稳态，实验结果与假设及网络药理学预测的生物学机制一致。

SNS通过上调结肠中CH25H、CYP27A1蛋白的表达，调节25-OHC和27-OHC的浓度，从而影响LXR的表达和活性，最终影响Th17分化和Th17/Treg平衡。研究还发现，SNS抑制了UC小鼠肝脏胆固醇的升高，逆转了BA合成向酸性途径的转变，从而降低了总胆汁酸(TBAs)中非12- oh BA的比例，进一步改善了结肠炎和伴随性肝损伤。

结论：基于SNS对肠道和肝脏损害的显著改善作用，该研究为SNS作为一种多器官受益的抗结肠炎处方奠定了基础，并揭示了胆固醇衍生物，即氧甾醇和胆汁酸，与SNS抗结肠炎作用的机制密切相关。

原始出处：

Wang A, Yang X, Lin J, et al. Si-Ni-San alleviates intestinal and liver damage in ulcerative colitis mice by regulating cholesterol metabolism. J Ethnopharmacol. Published online August 22, 2024. doi:10.1016/j.jep.2024.118715