红细胞冷凝集对全血细胞计数的影响分析

前言

检验质量一直是实验室永恒的主题，为临床提供准确可靠的检验结果是检验科工作的目标和责任。检验结果的准确，包括了检验前标本的准确采集、检验中仪器的状态和试剂的质量、以及检验后结果的审核分析等方面。其中检验结果的审核分析则是实验室工作中最重要的环节。通过结果的审核分析可以发现标本的异常情况，及时纠正则可以保证结果的准性。红细胞冷凝集是导致血细胞计数错误结果的因素之一，在日常检验工作中时有发生。 

红细胞冷凝集是一种现象，并且是可逆的。当血液离体后，在低于体温环境的试管内可发生肉眼可见的凝集现象，当恢复至体温条件时(37°C)，冷凝集现象可解除。血液标本出现红细胞冷凝集现象明显影响到全血细胞计数的结果。

原理分析

1、对红细胞相关参数的影响：红细胞凝集使得红细胞凝集成团，体积增大，这部分红细胞不能单个通过红细胞通道，所以未能计数在红细胞内，导致红细胞计数假性降低。

2、对红细胞相关参数的影响：多个红细胞聚集后形成的红细胞团在通过计数孔时引起脉冲增大，引起MCV假性升高，同时RBC计数减低，二者以RBC计数减少为主，因此HCT随之也降低。 

3、对血红蛋白的影响：Hb检测是通过加入SLS溶血素溶解红细胞，采用比浊法测定，红细胞凝集对该方法无干扰。因此则造成了由 RBC，Hb，HCT 计算得到的 MCH，MCHC结果异常升高。 

4、对白细胞的影响：冷凝集素可凝集淋巴细胞，中性粒细胞，单核细胞，巨噬细胞使 WBC结果也假性减低[1] 。

5、对血小板的影响：RBC 与 PLT 虽然在相同的计数池内计数，但目前PLT 检测采用的多是鞘流计数方法，在一定程度上降低了细胞凝集的干扰，避免了异常血细胞脉冲的发生，降低了细胞凝集的干扰，因此水浴前后 PLT 计数结果无显著差异性。

分析

冷凝集素抗体可为多克隆或单克隆自身抗体，绝大多数单克隆冷凝集抗体发现于淋巴网状内皮细胞瘤患者，而多克隆冷凝集抗体则是由于感染引起[2]。冷凝集素对人红细胞I类抗原有特异性，30°C以下可使红细胞凝集，温度提高后凝集消失，健康人的血清中冷凝集素效价不高，一般在 16°C 以下可发生凝集，30°C 以 上不发生凝集[3]，所以实验室温度是避免血液标本冷凝集的一个重要环节。为了防止可能出现的RBC冷凝集现象对血细胞计数结果的影响，必需使实验室保持在合适的温度(18~22°C)，低于15°C或高于30°C均对血细胞计数结果有影响[4]。 

处理措施

1.温育法：将标本置于37°C温箱，温育30min，取出观察试管内抗凝血，未发现管壁内有凝集颗粒，混匀后立即上机再次测定[5]，如管壁仍然有凝集颗粒 则延长水浴时间至50min，再进行检测。

2.血浆置换法：适合重度凝集的标本，将血常规标本低速离心3-5分钟，用移液器缓缓将上层血浆取出弃掉，并记录丢弃的量，再加入等量37℃生理盐水，混匀后再次离心弃掉上层液体（冷凝集素），重复以上步骤3次后上机测定。

3.预稀释模式检测：即1:7模式，适合重度凝集，仪器会提供预稀释模式的加样量要求，按照要求吸取血样和稀释液，37℃水浴后迅速上机检测。

4.手工方法计数：将37℃温浴的血液10uL加入到2.0mL的37℃温盐水中，混合均匀，滴到牛鲍计数板上计数。

总结

红细胞冷凝集除了对 RBC，MCV计数结果有影响外，还对WBC计数也有影响，导致结果假性偏低，同时对红细胞的计算指标 Hct，MCH，MCHC也有影响，导致结果假性偏低和增高，但对Hb及PLT计数无明显影响。在审核血常规报告单时，除了要牢记“3规则”外：3*RBC=HGB、3*HGB=HCT，还要牢记ICSH推荐的复检规则：平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)超过正常上限 20g/L，即MCHC>380 g/L时, 要求检查标本是否有脂血，溶血，凝集及球形红细胞。根据这条规则可以及时发现标本冷凝集现象或其它的一些异常标本，对标本进行相应处理后重新测定，可有效保证检验结果的准确性。 

参考文献：

[1]李家增，王鸿利，韩忠朝. 血液实验学[M]. 上海:上海科技出版社， 1997:241. 

[2]Cooper RA，Bunn HF. Hemolytic Anemias [M]. Paris:Mcgraw Hill Inc，1984:1864-1866. 

[3]陈忠，张莉尼. 7 例抗 IgM 国内文献综合分析[J]. 临床检验杂志， 2002，20(2)93. 

[4]从玉隆，乐家新. 现代血细胞分析技术与临床[M]. 北京:人民军医 出版社，2005:60-65. 

[5]乐家新，马骏龙，徐菡，等. 红细胞冷凝集对不同类型血细胞分析 仪检测结果的影响探讨[J]. 医疗卫生装备，2009，30(2):69.