J Ethnopharmacol：补阳还五汤通过抑制与小胶质细胞PGC-1α相关的NLRP3炎性体/焦亡，阻止t-PA延迟输注后的出血性转化

背景：延迟组织型纤溶酶原激活剂（t-PA）溶栓，其治疗时间窗限制在缺血性卒中（IS）后4.5小时内，增加了出血性转化（HT）和随后的神经毒性的风险。研究表明，受PGC-1α反向调控的NLRP3炎性小体激活可导致小胶质细胞极化和焦亡，对神经细胞和血脑屏障造成损伤。补阳还五汤（BHD）是IS恢复期广泛使用的中药方剂，临床研究发现补阳还五汤对延迟t-PA治疗后HT损伤的作用，但其作用机制有待进一步阐明。

研究目的：探讨延迟t-PA治疗BHD对缺血性大鼠脑的治疗效果及其潜在机制。

方法：采用高效液相色谱法（HPLC）对BHD提取物进行成分鉴定，采用液相色谱-质谱联用技术（LC-MS）对BHD提取物在大鼠脑中的有效成分进行分析。体内实验采用大脑中动脉闭塞（MCAO）5 h，t-PA输注0.5 h，再灌注19 h的方法，体外实验采用脂多糖(LPS)-三磷酸腺苷（ATP）刺激BV2细胞，激活小胶质细胞焦凋亡，其中采用MCC950（NLRP3抑制剂）和NSA（GSDMD抑制剂）进行反向验证。利用PGC-1α siRNA研究BHD抗BV2细胞小胶质细胞极化和焦亡的机制。

结果：HPLC分析显示，BHD的指纹图谱包含六个参考标准品（羟基红花黄色素A、钙苷-7-葡萄糖苷、芍药苷、芒柄花素、阿魏酸和苦杏仁苷），其中最后两个可以通过LC-MS分析在大鼠脑中找到。

在接下来的实验中发现：(1)BHD改善了MCAO HT大鼠的神经预后，改善了血脑屏障的结构完整性和神经元结构；(2) t-PA的存在促进HT大鼠PGC-1α的抑制和小胶质NLRP3炎性小体的激活及焦亡；(3) BHD促进小胶质细胞由M1型向M2型转化，抑制炎症反应；(4) BHD抑制小胶质细胞NLRP3炎性体/焦亡活化，阻止NF-κB易位入核，并增强t-PA延迟溶栓后缺血大鼠小胶质细胞特异性PGC-1α；(5)在LPS-ATP诱导的BV2细胞中，BHD抑制NLRP3炎性体的组装，增加PGC-1α的表达；(6) PGC-1α沉默退出了BHD对NLRP3炎性体/焦亡的保护作用。

结论：从机制上看，BHD通过上调小胶质细胞PGC-1α抑制NLRP3炎性体和焦亡，对延迟t-PA治疗后HT损伤具有保护作用，可能是HT损伤的辅助治疗方法。

原始出处：

Pan Y, Nie L, Chen W, et al. Buyang Huanwu Decoction prevents hemorrhagic transformation after delayed t-PA infusion via inhibiting NLRP3 inflammasome/pyroptosis associated with microglial PGC-1α. J Ethnopharmacol. Published online December 20, 2024. doi:10.1016/j.jep.2024.119275