HPV亚型检测有助于宫颈癌筛查

宫颈癌是世界第三大女性恶性肿瘤，是中国女性第二大最常见的恶性肿瘤。据世界卫生组织估计，全世界每年有逾47万新发宫颈癌病例，中国每年新发宫颈癌病例数 约占世界总发病数的28%。据权威机构估计，若缺乏适当、有效的筛查方法及预防计划，至2025年，亚洲的宫颈癌发病率将上升40%。

近年来，宫颈癌病因人类乳头状瘤病毒（HPV）的发现及分型为宫颈癌筛查提供了一个全新途径。高危HPV基因检测以其高灵敏度、高特异性、快速、客观的特 点，联合传统、经济的细胞学检测，成为宫颈癌筛查的最佳方案，并得到美国预防服务工作组（USPSTF）发布的2012年新版宫颈癌筛查指南、美国癌症学 会（ACS）、美国阴道镜检查与宫颈病理学会（ASCCP）和美国临床病理学会（ASCP）联合发布的2012年新版宫颈癌筛查指南的推荐。

HPV 是一种极为常见的病毒，高达75%的女性在一生的某一阶段会感染HPV。HPV持续感染是宫颈癌及其癌前病变——宫颈上皮内瘤变（CIN）——的主要病 因，且宫颈病变程度越重，高危HPV 感染率越高。在CIN 1、CIN 2 、CIN 3患者中，HPV感染率分别为30 %、55 %和65 %，而99.8%以上的宫颈癌患者体内能检测到HPV感染，HPV阴性者几乎不会发生宫颈癌。

HPV 有多种亚型，不同亚型的致病性及疾病预后均有差异。造成宫颈癌及其癌前病变的高风险HPV亚型有14种，其中HPV16和HPV18这两种病毒株的风险最 高，可导致70%－85%的宫颈癌病例。多达47,000名女性参与的美国最大型的宫颈癌普查——ATHENA研究发现，感染HPV16或18的女性，发 展为宫颈癌前病变的风险比不携带这类病毒的女性高35倍。cobas 4800 HPV检测是目前唯一获美国药品及食品监督管理局核准，可以同时测出HPV16、HPV18及有否其他12种高风险HPV病毒株的HPV基因检测方法。

宫颈癌病 因明确，且发展过程中存在较长的、可逆转的癌前病变期，是唯一一种能够通过医学干预降低发病率和死亡率的恶性肿瘤。如能进行HPV早期检测，并在癌前病变 阶段进行阻断性治疗，其治愈率可达98%。而一旦疾病发展成癌症并扩散至其他器官，每5名女性患者中只有1人能存活5年。

当 前的宫颈癌初步筛查主要采用的是巴氏涂片，这种检查方法于60年前面世，主要检查的是宫颈细胞变异，而非有否HPV感染。而且，巴氏涂片必须要经验丰富及 技术水平极高的实验室人员进行操作和解读，才能确保其准确性。近年来，液基薄层细胞学检测（TCT）也成为宫颈癌筛查的常用方法，其制片技术和细胞学的形 态学描述分类（TBS）有效提高了诊断价值。但TCT的特异性虽高(85%-95%)，灵敏度却低，不菲的价格也使其在大规模筛查应用上受到限制。最新的 cobas HPV基因检测，则检测宫颈位置是否存有HPV，并不需要主观分析或诠释，具有更高的灵敏度和可重复性，已被美国临床广泛接受。ATHENA研究发现，在 年龄30岁及以上的妇女中，每10位HPV 16和/或18阳性的女性中就有1位为宫颈癌前病变，而她们的巴氏涂片检查结果是正常的。此外，许多文献报道发现，单纯使用HPV基因检测CIN2或 CIN3的灵敏度达94.6%，而细胞学方法的灵敏度仅有一半左右，但两者结合的灵敏度可以达到100%。

2012 年，由极为权威的美国预防服务工作组（USPSTF）发布的新版宫颈癌筛查指南，美国癌症学会、美国阴道镜检查与宫颈病理学会和美国临床病理学会联合推出 的新版宫颈癌筛查指南皆推荐对30岁以上女性采用细胞学和高风险HPV基因检测进行“联合检测”，以有效检测预防宫颈癌。依照新版指南：所有女性应从21 岁开始接受宫颈癌筛查，其中，21—29岁的女性应每3年接受细胞学检测，若结果异常，则建议接受HPV基因检测；30—65岁的女性，强烈建议每5年接 受巴氏涂片和高风险HPV联合检测，若高风险HPV基因检测为阴性，则5年内无需再接受筛查；若细胞学检测为阴性，HPV基因检测为阳性，则需要每年重复 进行联合检测。若重复联合检测的结果显示细胞学阴性、HPV阴性，则每3年进行重复联合检测即可；若重复联合检测的结果不明确或HPV呈阳性，则需要进一 步接受阴道镜检查。（见下图）另外，若采用cobas 4800 HPV基因分型检测。若HPV 16和18为阴性，则每年重复进行联合检测即可；若HPV 16或18呈阳性，则需要进一步接受阴道镜检查。年龄大于65岁，曾做过上述检测且结果正常者可不再接受筛查，而被诊断为宫颈癌前病变的女性则应该继续接 受常规筛查，即使接种过HPV疫苗，也应当遵照指南接受筛查。指南尤其强调，HPV16或18检测阳性的女性，即使细胞学检测显示正常，也需接受阴道镜检 查。目前，亚太区各国专家正研究跟随美国相关指南，从而改善现行宫颈癌筛查制度，希望进一步帮助降低宫颈癌的发病率和死亡率。

 

4 月16日，美国阴道镜检查与宫颈病理学会（ASCCP）主席Thomas Carr Wright, Jr.教授在北京的一场HPV研讨会上介绍说：“包括ATHENA在内的大量研究表明，高风险HPV基因检测拥有更高的灵敏度，阴性预测值也较高。高风险 HPV基因检测，尤其是对HPV16和18的分型检测，代表了宫颈癌筛查及预防未来发展的新方向。新版宫颈癌筛查指南建议对30岁及以上的女性采用高风险 HPV 基因检测联合细胞学检测，以期在癌前病变阶段及时发现病情，保护更多女性避免患上宫颈癌，延长筛查的间隔时间，降低总体的医疗支出。”

目 前临床常用的HPV 基因检测方法主要基于聚合酶链反应（PCR）或核酸杂交技术。第二代核酸杂交捕获法，可同时检测13种高危HPV，检测结果重复性好，敏感性、特异性较 高，得到了较广泛的应用，但其无法对HPV进行基因分型鉴定，尤其无法鉴别HPV16和HPV18这两种风险最高的亚型，同时该技术对实验条件和操作技术 要求较高，容易引起交叉反应导致假阳性，降低特异性。PCR检测以基因扩增为基础，灵敏度高，是目前进行HPV基因检测及分型的最好方法，操作相对简单、 省时，标本来源不受限制，但由于具备高灵敏性，容易产生样品交叉污染导致的假阳性，且进行基因分型时操作繁琐。

cobas 4800 HPV DNA检测采用全自动样品制备与实时聚合酶链反应（PCR）扩增和检测技术，集全自动样品制备、PCR扩增、基因分型检测于一体，提供HPV16型、18 型和其他12个高风险HPV亚型（HPV31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,66和68b）汇总的结果。除检测HPV病毒之 外，也检测β-球蛋白，作为内部质控并确定样本是否含有抑制扩增的因素。其样本制备由x 480全自动样品制备仪自动完成，采用的磁珠分离技术具有高效、易于实现自动化的特点，并可消除潜在的PCR抑制。PCR扩增则采用z 480全自动实时聚合酶链反应（PCR）扩增仪。为保证PCR结果的准确性，预防非特异性PCR扩增和污染，z480的反应体系中加入了AmpErase 酶进行选择性扩增，且工作环境密闭，不需进行常规PCR实验室的分区操作，避免了人为污染。包括ATHENA在内的多项研究结果显示，cobas 4800 HPV DNA检测灵敏度高，与HC-2的一致性较好。其临床表现和重复性完全符合当前对HPV基因检测的要求。该检测已获得美国FDA、欧盟CE认证，并于 2012年获得中国SFDA批准，在宫颈癌筛查及诊疗领域将拥有广阔的应用前景。

4月16日，在北京的同一场HPV研讨会上，中国医学科学院、北京协和医院肿瘤研究所乔 友林教授指出：“感染HPV16或HPV18的女性，其病程发展至宫颈癌前病变的风险远高于未感染者。罗氏诊断cobas 4800 HPV DNA检测试剂系统不仅能检测到高风险亚型，还能鉴别这两种风险度最高的HPV亚型，可以帮助临床医师更好地找到感染者，判断她们患癌的近期和远期风险， 有些人需要立即处治，及时发现早期病变，尽早治疗；还有些人可以密切追踪，预防宫颈癌的发生。”