J Ethnopharmacol：左归丸通过Notch1/Nrf2通路改善卵巢干细胞的干性、调节细胞周期和减少细胞凋亡，改善化疗诱导的卵巢衰老

背景：左归丸（ZGP）是一种经典的配方，起源于明代，已被广泛用于治疗肾虚相关疾病，包括卵巢衰老。该研究旨在探讨ZGP对化疗药物环磷酰胺（CTX）诱导的卵巢衰老的影响及其潜在机制，以及ZGP对治疗靶点卵母细胞（OSCs）的影响，包括Notch1/核因子-红细胞2相关因子2（Nrf2）通路。

方法：采用高效液相色谱法对左归丸的有效成分进行分析。体内实验通过腹腔注射CTX建立雌性大鼠卵巢衰老模型，然后用ZGP和脱氢表雄酮（DHEA）治疗8周。通过腹腔注射Notch通路抑制剂DAPT，然后进行ZGP干预，以验证其治疗效果。通过转录组测序分析ZGP治疗CTX诱导卵巢衰老前后的差异基因，通过KEGG和GO分析评估相关信号通路和生物学过程的变化。体外实验包括卵巢生殖干细胞（OSCs）的提取、分离和纯化，然后用Notch1过表达质粒转染。采用CTX有效成分4-羟基环磷酰胺（4HC）进行模型干预，采用ZGP、含DHEA的血清、DAPT对卵母干细胞进行干预。

观察CTX造模的效果、ZGP的治疗效果及大鼠一般情况。H&E染色评价卵巢各阶段形态及卵泡计数。ELISA检测血清激素水平，qPCR、Western blot、流式细胞术、免疫荧光和免疫组化检测Notch1/Nrf2通路、细胞周期蛋白和干细胞相关指标的表达。流式细胞术、TUNEL荧光和CCK8检测评估细胞周期组成、凋亡和增殖的变化。最后，利用ChIP-qPCR验证Notch1对靶基因NFE2L2的转录调控作用。

结果：ZGP能改善卵巢衰老大鼠血清性激素水平，增强卵巢指数，优化卵巢和子宫形态及卵泡数量组成。转录组测序后，KEGG分析富集了Notch信号通路和细胞周期，GO分析强调了Notch通路的富集和干细胞群体的维持。各种实验证实，ZGP显著提高了细胞周期相关蛋白Cyclin D1 （CCND1）、Cyclin E1 （CCNE1）、Cyclin依赖性激酶抑制剂1a （CDKN1A）、干细胞标志物小鼠Vasa同源物（MVH）、八分子体结合转录因子4（Oct4）、Fragilis、5-溴-2′-脱氧尿苷（BrdU）以及Notch1和Nrf2在卵巢衰老组织和OSCs中的表达。

ZGP还能促进4HC损伤的OSCs细胞增殖，优化OSCs细胞周期组成，减少G0/G1期阻滞，减少早期和晚期凋亡。ZGP可逆转阻断Notch通路对OSCs干细胞干性和细胞周期的不利影响。此外，ZGP可能通过上调OSCs中Notch1的表达，激活其靶基因NFE2L2的调控，从而发挥治疗作用。

结论：ZGP通过调节Notch1/Nrf2通路保护CTX诱导的卵巢衰老大鼠卵巢功能，恢复血清性激素水平，维持卵泡正常发育，促进衰老OSCs增殖，优化细胞周期，减少细胞凋亡，保持干性，从而缓解卵巢衰老。

原始出处：

Li Z, Lin Y, Zou Y, et al. Zuogui pills ameliorate chemotherapy-induced ovarian aging by improving stemness, regulating cell cycle and reducing apoptosis of oogonial stem cells via the Notch1/Nrf2 pathway. J Ethnopharmacol. Published online November 22, 2024. doi:10.1016/j.jep.2024.119105